拟南芥乙烯应答基因HLS1的原核表达及多克隆抗体制备

【目的】制备乙烯应答基因HLS1多克隆抗体,在过表达植物中检测HLS1的积累,为深入研究HLS1响应乙烯信号通路的分子机制奠定基础。【方法】构建pET28a-HLS1c原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导获得重组蛋白HLS1c-His;镍柱亲和纯化重组蛋白后免疫家兔获得抗HLS1血清,利用抗原亲和纯化抗血清获得高纯度的HLS1多克隆抗体;用HLS1抗体和GFP抗体,检测原生质体瞬时转化体系中GFP-HLS1c融合蛋白的表达;用农杆菌蘸花法获得过表达GFP-HLS1g的转基因植物,用HLS1抗体和GFP抗体检测GFP-HLS1g融合蛋白的表达。【结果】成功构建了原核表达载体pET28a-HLS1c,并在大肠杆菌系统中诱导获得重组蛋白HLS1c-His,且多以包涵体形式存在。纯化的HLS1c-His多克隆抗体,能清晰检测到约80 ng原核表达的HLS1抗原。纯化的HLS1抗体不仅能检测到原生质体中瞬时表达的GFP-HLS1c融合蛋白,也能检测到过表达转基因植物株系中的GFP-HLS1g融合蛋白,并且与标签蛋白GFP对应抗体所检测到的特异性条带大小一致。【结论】成功制备了拟南芥HLS1蛋白多克隆抗体,为HLS1蛋白在植物发育中的功能研究奠定了基础。     

文冠果叶总皂苷的提取工艺优化及减肥降脂功效

【目的】优化文冠果叶总皂苷的提取工艺，并对其减肥降脂功效进行分析。【方法】采用单因素试验并结合Box-Behnken响应面法，对文冠果叶总皂苷的提取温度、液(mL)料(g)比、乙醇体积分数进行优化。采用高脂饲料喂养小鼠建立高血脂症模型，建模4周后，以奥利司他为阳性对照，分别采用高（200 mg/kg）、中（100 mg/kg）、低（50 mg/kg）剂量组文冠果叶总皂苷连续灌胃4周，检测小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的浓度，分析不同剂量文冠果叶总皂苷对小鼠体内胰脂肪酶的抑制作用。【结果】文冠果叶总皂苷的最佳提取工艺条件为：提取温度60 ℃，乙醇体积分数70%，液(mL)料(g)比30∶1，此时文冠果叶总皂苷得率为4.952%。对小鼠的减肥降脂试验表明，文冠果叶总皂苷对胰脂肪酶的抑制活力最高可达68.29%，且在高血脂模型中，高、中、低剂量文冠果叶总皂苷均可显著或极显著降低血清中的TC、TG、LDL-C浓度，提高HDL-C浓度，其中高剂量组的降脂作用与阳性对照药物奥利司他效果相当。【结论】文冠果叶总皂苷减肥降脂功效显著，能够有效抑制胰脂肪酶活力，降低胆固醇和甘油三酯含量，进而促进脂肪代谢。     

氮肥施用对直播冬油菜产量及氮肥利用率的影响

为探明安徽省直播冬油菜种植中适宜的氮肥用量、氮肥种类和施氮方式，通过田间小区试验，研究尿素不同用量及等氮量尿素和控释尿素不同施用方式对直播冬油菜产量、氮肥累积量及氮肥利用率的影响。结果表明：施氮水平和施氮方式对直播冬油菜产量具有显著影响，成株率与产量之间呈显著正相关，施氮量180 kg N·hm^-2条件下，尿素分次施用处理（N180）和控释尿素一次性施用处理（CRU180）在生育中后期能有效提高直播冬油菜密度。施氮量240 kg N·hm^-2、尿素分次施用处理（N240）角壳和茎秆氮素累积量分配比例增加，籽粒分配比例减少，氮肥表观利用率、氮肥农学效率、氮肥生理效率和氮肥偏生产力显著降低，籽粒产量不增反降，较CRU180和N180分别降低2.87%和9.67%。各施氮处理中，N180处理产量最高，较其他施氮处理显著增产7.53%~82.15%。施氮量180 kg N·hm^-2条件下，相比尿素一次性施用处理（U180），CRU180和N180显著增产8.53%和16.69%，籽粒氮素累积量显著增加8.80%和16.02%，氮肥表观利用率显著增加11.68%和14.30%，氮素农学效率显著增加12.53%和24.46%，氮素生理效率增加0.74%和9.13%，氮肥偏生产力显著增加8.59%和16.76%。综合本试验直播冬油菜产量、氮素累积量和氮肥利用率结果来看，合理的氮肥用量和氮肥品种可以有效增加直播冬油菜的成株率和氮素累积量，进而增加产量、提高氮肥利用率。安徽省直播冬油菜施氮量180 kg N·hm^-2，尿素分次施用和控释尿素一次性施用，均能达到产量和氮肥利用率的双向提升。考虑到直播冬油菜轻简化发展大趋势，建议采用控释尿素一次性基施。     

绵羊HTR4基因的生物信息学分析

利用生物信息学数据库及软件，对绵羊羟色胺受体4基因(hydroxytryptamine receptor 4，HTR4)进行生物信息学分析，以初步了解其结构并进行功能预测。结果表明，绵羊HTR4基因所含最大长度的开放阅读框为1 317 bp，编码438个氨基酸残基。HTR4基因编码的蛋白分子质量为49 437.09 KDa，理论等电点(pI)为8.32。亚细胞定位结果表明其编码产物主要定位于质膜(60.9%)，且不属于分泌蛋白。HTR4蛋白不存在信号肽序列，存在7段跨膜结构且无低复杂性段区域，该蛋白的二级结构以α螺旋为主，且三级结构主要由α折叠缠绕形成。     

美洲南瓜枯萎病生防药剂和生防菌株筛选

为筛选对美洲南瓜枯萎病具有良好抑制作用的生防药剂及生防菌株，选择4种植物源生防农药和4种生防菌株对美洲南瓜枯萎病进行药剂筛选和室内防效测定。结果表明:生防木霉T6菌株发酵液以及0.3%丁子香酚对该病菌具有较强的抑制作用，稀释5倍的生防木霉T6菌株发酵液制成含药培养基培养7 d时，对病原菌的抑制率为85.7%；稀释250倍的0.3%丁子香酚可溶性液剂制成含药培养基培养7 d时，对病原菌的抑制率为82.6%。长枝木霉T6菌株发酵液室内防效测定结果显示有一定防效。     

主要农作物秸秆养分资源现状及其肥料替代潜力分析——以安徽省为例

安徽省农作物秸秆资源丰富,充分利用秸秆养分资源对于农田养分投入的合理分配具有重要意义。评估全省主要农作物秸秆还田当季有效养分替代化肥潜力,可为安徽省减肥增效提供科学依据。本研究以安徽种植面积较大的主要农作物水稻、小麦、玉米、大豆、花生和油菜为研究对象,通过查阅安徽省统计数据和公开发表的文献资料,对2017年安徽省主要农作物秸秆数量、秸秆还田率以及还田当季养分利用率进行估算,明晰了全省化肥减施潜力。结果表明:2017年安徽省主要农作物秸秆资源量为4 699.9万t,秸秆资源分布上呈北部和中部较多、南部最少的特征。秸秆养分资源总量为124.8万t,N、P_2O_5和K_2O分别为38.1万t、11.4万t和75.3万t,分别占全省主要农作物养分需求的40.1%、32.1%和68.9%。理论上,秸秆全量还田,且养分充分利用的情况下,秸秆养分替代化肥潜力大。但秸秆养分N、P_2O_5和K_2O当季利用率分别为38.9%、52.3%和69.9%,实际秸秆N、P_2O_5和K_2O养分还田量仅占主要农作物养分需求的15.6%、16.8%和48.2%,分别占农田养分总投入量的8.6%、6.4%和41.4%。通过秸秆还田,全省可减施化肥63.3万t,减施比例为19.8%, N、P_2O_5和K_2O减施比例分别为11.4%、17.2%、40.7%。进一步提高秸秆还田率和当季养分释放率,是推进全省化肥减施增效的有利手段。     

海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因检测与致病性分析

Cassiicolin毒素蛋白是橡胶树棒孢霉落叶病菌的主要致病因子。本研究对分离自海南省5个市县的橡胶树棒孢霉落叶病菌进行了鉴定,形态学鉴定结合分子生物学鉴定结果表明,病原菌为多主棒孢。利用Cassiicolin毒素不同亚型编码基因特异性引物和菌饼活体接种法分别鉴定了分离菌株的毒素蛋白类型和致病性,结果显示,分离的35个菌株都含有Cas5基因,未发现含其他类型的毒素基因,表明海南橡胶树棒孢霉落叶病菌为含Cas5毒素蛋白优势群体;所有菌株对橡胶树品种‘RRIM600’都能够致病,但是在不同抗性品种上致病性存在一定差异。     

Growth Responses and Differences in Gene Expression depending on Cultivation Temperature between Alternative type Wheat Varieties

Journal of Crop Science and Biotechnology - Two domestic wheat varieties were grown in the growth chamber set at 17°C, 20°C, 23°C and 26°C on average after the emergence of...     

Interactive effects of nitrogen fertilizer and altered precipitation on fungal communities in arid grasslands of northern China

Journal of Soils and Sediments - Fungi play an essential role in regulating the functioning of terrestrial ecosystems and are sensitive to climate change factors. Climate change incidents, such as...     

Essential amino acids supplementation to practical diets affects growth,feed utilization and glucose metabolism‐related signalling molecules of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala)

Six diets were formulated to investigate the success of fish meal (FM) replacement by plant proteins; diet 1 reflected a commercial feed (8% FM), diet 3 contained 4% FM, and diet 5 was devoid of FM. Whereas, diet 2, diet 4, and diet 6 reflected diet 1, diet 3, diet 5, respectively, and supplemented with essential amino acid (EAA). At the end of 8‐week trial, there was no significant difference in survival rate. Significantly higher final weight, weight gain rate, and specific growth rate were recorded in the group fed diet 2 compared with the other treatments (except diet 4) (p < 0.05). Feed conversion ratio of fish fed diet 2 was significantly lower than those fed diets 1, 3, and 5 (p < 0.05). The lowest feed intake and highest protein efficiency rate were found in fish fed diet 2 (p < 0.05). There was no significant difference in whole body compositions between treatments. Plasma aspartate transaminases, alanine aminotransferase, and glucose were significantly affected by dietary treatments (p < 0.05), while plasma protein and albumin contents were not influenced by the treatments. The relative expression of target of rapamycin (TOR) and phosphatidylinositol 3‐kinase, regulatory subunit 1 (alpha) (PIK3R1) in fish fed diet 3 (4% FM) were significantly down‐regulated compared with those fed diet 6 for TOR and diets 4 and 6 for PIK3R1 (p < 0.05). Insulin receptor substrate 1 (IRS‐1) and janus kinase 3 (JAK3) expressions were fluctuated, with the higher levels in fish fed diets 4 and 6. In conclusion, the findings of this study indicate that plant protein mixture supplemented with EAA could be used to substitute FM in practical diet for Megalobrama amblycephala.